新型冠状病毒（2019-nCoV）检测方法介绍-蛋白检测

冠状病毒外形呈球形，在病毒包膜外有明显的棒状膜外粒子，膜外粒子形状酷似中世纪欧洲帝王王冠的结构，因此得名“冠状病毒”。冠状病毒主要由核酸基因（RNA）以及有基因编码的外壳蛋白两部分组成。外壳蛋白包括棘突蛋白（S蛋白）、包膜蛋白（E蛋白）、膜蛋白（M蛋白）以及核衣壳蛋白（N蛋白）组成。其结构图如下：

2019新型病毒是目前发现的第七种感染人体的冠状病毒。通过对新冠病毒编码的蛋白进行检测，可判定患者是否被感染。蛋白检测主要依赖于ELISA技术平台及免疫层析技术平台。

ELISA检测平台

ELISA（酶联免疫吸附技术）是利用酶的高效催化放大作用与特异性抗原-抗体反应相结合而建立的一种标记免疫技术。根据检测原理的不同可分为直接法、间接法、双抗夹心法、竞争法四种。2019-nCoV蛋白使用双抗夹心法进行检测，其实验流程为：

1. 将配对抗体中的一株抗体固定至固相载体表面，并保持其免疫活性；
2. 将另一株抗体与某种酶联结成酶标抗体，此酶标抗体既保留其免疫活性，又保留其酶活性；
3. 测定时将待测样本固相载体孵育，形成抗原-抗体复合物，再通过洗涤将未与固相载体结合的物质分开；
4. 加入酶标抗体，通过反应结合到固相载体上（此时固相载体上为“抗体-抗原-酶标抗体”复合物，即双抗夹心）；
5. 加入酶反应底物，底物被酶催化后显色，根据颜色深浅可以定性分析是否含有2019-nCoV抗原。

免疫层析技术

免疫层析技术是20世纪90年代初在免疫渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术。该技术利用了抗原抗体特异性结合的特性，首先将能够同时结合同一抗原的一对抗体分别固定于免疫层析检测试纸条的检测线（T线）与结合垫上，结合垫上的抗体带有显色标记（荧光标记或胶体金标记）。在试纸条滴样处滴加样品，样品会向试纸条另一端流动，当流动至结合垫，样品中的抗原会和结合垫上的标记抗体结合，形成“标记抗体-抗原”复合物，当样品流动至检测线时，抗原会被T线上的抗体捕获，形成“标记抗体-抗原-捕获抗体”复合物，随着T线上捕获抗原的不断增加，T线会出现愈加明显的颜色变化。如果T线出现颜色变化，则说明待测样本中含有待测抗原。

常见检测平台

• 1. 胶体金平台
• 2. 免疫荧光平台

ELISA检测与免疫层析检测方法对比

ELISA检测具有技术可靠、试剂方便易得、灵敏度更高等优点，免疫层析检测具有测定更为方便、快速、不需要仪器，随到随测等优点。

参考文献

[1]. Xintian Xu.Evolution of the novel coronavirus from the ongoing Wuhan outbreak and modeling of its spike protein for risk of human transmission.SCIENCE CHINA Life Sciences.2020
[2]. Buss H , Chan T P , Sluis K B , et al. Protein Carbonyl Measurement by a Sensitive ELISA Method[J]. Free Radical Biology and Medicine, 1997, 23(3):361-366.
[3]. 隋菊英. 胶体金免疫层析法和ELISA法在HBsAg检测中的方法学评价[J]. 中国医药导报(36):81-82.

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