实时荧光定量PCR预混液(2×SYBR Green Mix)
产品参数
产品名称 | 组成成分 | 规格 | 货号 |
2×SYBR Green qPCR预混液 |
热启动Taq酶、SYBR GreenⅠ、dNTP Mix、Mg2+、Enhancer、特殊稳定剂和优化的缓冲液 | 1 ml | M107R1 |
5 ml |
产品特征
灵敏度高:能对低拷贝或多样性模板进行定量。
特异性强:采用热启动酶的激活机制,抑制非特异性扩增 。
重复性好:扩增曲线重合度高,受干扰影响少。
扩增效率高:扩增曲线Ct值低,起峰快,效率高。
产品应用
1)基于荧光定量PCR检测;
2)核酸扩增和基因表达;
3)自动化和高通量的定量基因分型研究;
4)基因组学相关应用。
使用方法
(1)qPCR反应体系配制
试剂 | 50μl | 20 μl |
SYBR Green预混液 | 25 μl | 10 μl |
Forward Primer(10 μM) | 1 μl | 0.4 μl |
Reverse Primer(10 μM) | 1 μl | 0.4 μl |
模板DNA | X μl | X μl |
无菌超纯水 | Up to 50 μl | Up to 20 μl |
(2)PCR 反应条件
95℃ | 15min | 预变性 |
95℃ | 10 Sec | 循环反应(40 cycles) |
55~60℃ | 20 Sec | |
72℃ | 20 Sec | |
95℃ | 15 Sec | 融解曲线 |
60℃ | 60 Sec | |
95℃ | 15 Sec |
(3)qPCR反应有效性确认标准
1)线性关系以及扩增效率确认:
标准曲线相关系数(R2)>0.98
标准曲线斜率介于 -3~-3.5之间
PCR扩增效率(E)介于0.9~1.2之间。
2)重复性确认:
重复管之间的STD<0.2
注:详细操作流程参照说明书。
案例介绍
(1)扩增曲线
图1. 欧凯生物,国产试剂,进口试剂以及三者比较扩增曲线对比图。由图1可以看出,在同样的扩增条件下,欧凯生物的SYBR Green Mix起峰快,Ct值低,可重复性好,扩增效率高。
(2)熔解曲线
图2. 欧凯生物,国产试剂,进口试剂以及三者比较熔解曲线图。由图2可以看出,在同样的条件下,欧凯生物的熔解曲线单一峰,具有特异性强、重复性好、灵敏度高。
(3)标准曲线
图3.欧凯生物,国产试剂,进口试剂对比图。欧凯生物的SYBR Green Mix使定量PCR可以在宽广的定量范围内获得良好的线性关系。
原始数据如下: